材料與方法

CKX41 倒置熒光顯微鏡（Olympus）； VICTOR X5 型 酶標儀（Biotek 公司）；KQ?100DE 型 數控浴式超聲儀（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）；1?15K冷凍臺式離心機（德國Sigma公司）；流式 細胞儀FACS VantageTM（美國Becton Dickinson公司）。將細胞以每孔 5 × 103 個的密 度，接種于 96 孔板中，37 ℃、5% CO2 培養箱培養 24 h 后，加入含不同濃度雌激素（0、0.5、1、5、10、 100 nmol/L）培養基，每組設 5 個復孔。繼續培養 24 h 后，棄舊培養基，每孔加入 10 μL 5 mg/mL 的 MTT 溶液和100 μL無血清DMEM/F12培養基，培養 箱中孵育 4 h。

結果

使用不同濃度 的雌激素處理 MCF?10A 和 MCF?12A 細胞 24 h，結 果顯示，0 ~ 10 nmol/L 的雌激素濃度可以促進細胞 的增殖，并且 5 nmol/L 為最佳促進濃度。 與空白組相比較，雌激素組中細胞的活性顯著高，同時 8?OHdG 和 LDH 水平明顯上升，即細胞毒性和 DNA 氧化損傷增高，但細 胞凋亡水平反而降低，差異均有統計 學意義（P < 0.01）。另外氧化應激是 DNA 損 傷的重要原因之一。而氧化酶能抑制氧化應激 清除產生的 ROS，保護細胞免受損傷。Nrf2 作 為細胞氧化應激反應的關鍵調控因子，調控 HO?1 和 NQO1 等氧化酶的表達，維持氧化還原穩態，消除致癌物質。本研究結果顯示，雌激素可以 刺激 MCF?10A 和 MCF?12A 細胞增殖，并且在一定 濃度范圍內隨濃度增加，增殖效果越明顯。同時 雌激素能增強正常乳腺細胞遷移和克隆能力，降 低細胞凋亡水平，與 YAN 等的研究結果相一致。 ANWESHA 等通過雌激素誘導細胞后發現 8? OHdG 的表達水平明顯增高，確定雌激素可誘導 DNA 的氧化損傷，本實驗研究也有相一致的結 果。研究結果進一步發現，雌激素能夠促進 ROS 在胞內積累和抑制 SOD、GPX、CAT 和 TAC 等氧化 酶的活性，并調控 Nrf2 及其下游 HO?1 和 NQO1 的 表達，引起氧化應激，誘導細胞 DNA 的氧化損傷。

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