黃精為百合科植物多花黃精 Polygonatum cyrtonema Hua.、黃精 Polygonatum sibiricum Red.、滇 黃精 Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.的干燥根 莖,主要分布于我國中南部地區及江蘇、安徽、福 建、江西、浙江等省,現為緊缺的大宗藥材之一。 據多項科學考察報告及藥用植物志記載,福建龍棲 山、閩江源自然保護區、君子峰自然保護區、天寶巖 自然保護區、明溪縣等地區蘊藏有豐富的多花黃精野 生資源。因此,本研究采用可視化分析技術,初步 探索多花黃精的總黃酮提取工藝,為深入研究多花黃 精的藥材質量,以及確定其優質藥材的評價標準提供依據。
FA20004N 型電子分析天平,上海精密科學儀器有限公司;UV-9100 型紫外可見分光光度計,北京瑞利分析儀器公司;KQ-500E 型超聲波清洗儀,昆山舒美;HH-4 型數顯恒溫水浴鍋,國華 電器有限公司;SHB-Ⅲ型循環水式多用真空泵,鄭州 長城科工貿有限公司。 黃精飲片,購于福建中醫藥大學國醫堂,經福建中醫藥大學藥學院實驗師王河山鑒定,為百合科植物 多花黃精 Polygonatum cyrtonema Hua.的干燥根莖;蘆 丁對照品(HPLC 純度≥98%,批號 Y06J8S37439), 上海源葉生物科技有限公司;亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫 氧化鈉、無水乙醇等試劑均為分析純,實驗用水為超純水。
精密稱取蘆丁對照品 10 mg,置于 50 mL 量瓶中, 用 70%乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得濃度為 0.2 mg/mL 的蘆丁對照品溶液。分別精密吸取蘆丁對 照品溶液 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL 于 25 mL 量瓶 中,均加入 70%乙醇至 10 mL,再加入 5%亞硝酸鈉 溶液 0.7 mL,搖勻,放置 6 min,再加入 10%硝酸鋁 溶液 0.7 mL,搖勻,放置 6 min,再加入 4%氫氧化鈉 溶液 5.5 mL,用 70%乙醇定容至刻度,搖勻,放置 15 min,以 70%乙醇作為參比溶液,于分光光度計波 長 510 nm 處測定吸光度值。以吸光度為縱坐標,蘆 丁含量(mg)為橫坐標,進行回歸處理,繪制標準曲 線。結果表明,蘆丁對照品含量在 0.1~1.6 mg 范圍 內與吸光度線性關系良好,回歸方程為 Y=0.538X+ 0.013,r 2 =0.998。
本研究選用 U10(108 )均勻設計表,以乙醇濃度、 提取時間、提取次數、提取溫度、固液比為考察因素, 每個因素設 10 個水平,進行組方設計(見表 1),得 到 10 組方案。
取 20 g 黃精藥材,按表 1 設計分別提取制備樣品 液,過濾、減壓回收,制得終濃度均為 1 g/mL 的藥 液,備用。 2.2.3 樣品含量測定 本研究以總黃酮含量為評價指標。取樣品液適 量,按“2.1”項下方法測定總黃酮含量。根據蘆丁標 準曲線的回歸方程,計算各樣品液中總黃酮含量,結 果見表 2。
采用 Surfer8.0 軟件對試驗數據進行可視化分 析[6],通過將獲得的數據直接與考察變量繪成多幅二 維圖的方式,同時考察 2 種不同的影響因素與考察指 標之間的關系,可直接從數幅圖中找出最佳工藝的優 化區域。
以乙醇濃度為橫坐標,分別以提取溫度、提取時 間、提取次數和固液比為縱坐標,將試驗數據繪成二維圖。二維圖直觀反映出在不同考察因 素條件下乙醇濃度對總黃酮提取效果的影響。可以看 出,在乙醇濃度<40%的區域內,總黃酮提取效果影 響度淺,提取率低;在乙醇濃度為 50%~70%的區域 內,總黃酮提取效果影響度最深,提取率高。故乙醇 濃度影響總黃酮提取效果的最佳范圍為 50%~70%。
以提取時間為橫坐標,分別以乙醇濃度、提取溫 度、提取次數和固液比為縱坐標,將試驗數據繪成二維圖。二維圖直觀反映出在此不同考察 因素條件下提取時間對總黃酮提取效果的影響。可以 看出,在提取時間為 90~110 min 和 140~150 min 的 區域內,總黃酮提取效果影響度最深,提取率高,尤 其是 140~150 min 區域。故提取時間影響總黃酮提取 效果的最佳范圍為 140~150 min。
本研究采用均工藝。由于均 不能采用常規 過非線性、線 建立多元/一元 Au 佳范圍 橫坐標,分別 次數為縱坐標 二維圖直觀 對總黃酮提 ∶8 的區域內 在固液比為 效果影響度最 取效果的最佳 均勻設計優選 均勻設計的 規的方差分析 線性或逐步 元函數模型進 提取溫度 提取溫度 固液比 固液比 ug.2019 Vo 別以乙醇濃度 標,將試驗數 觀反映出在此 取效果的影 內,總黃酮提 為 1∶14~1 最深,提取率 佳范圍為 1∶ 選多花黃精 試驗結果沒 析方法進行數 回歸分析的 進行定量分析 l.26 No.8 、提取溫度、 數據繪成二維 此不同考察因 響。可以看 提取效果影響 ∶18 的區域 率高。故固液 14~1∶18。 中總黃酮的 有整齊可比 數據分析,需 方法篩選變 析。本研究結果數據采用非線性、線性或逐步回歸分析方法均難 以建立有效的函數模型,因而本研究采用一種直觀、 簡明的分析方法——可視化分析法,將試驗所得結果 數據與考察變量繪成多幅二維圖,同時考察 2 種不同 的影響因素與考察指標之間的關系,直接從數幅圖中 找出最佳工藝的優化區域。近年來,可視化分析法 在中藥研究中得到了較為廣泛的應用。本研究對 試驗數據進行可視化表征,利用二維圖整體反映不同 提取條件下多花黃精藥效成分的含量,實現了提取工藝的優化。