我國化妝品行業(yè)迅速發(fā)展，近兩年來一直保持 18%～ 20% 增長，化妝品已經(jīng)成為人們生活的必需 品，我國現(xiàn)也成為僅次于美國的全球第二大化妝品市場。其中，美白類化妝品的產(chǎn)量得到快速增長， 2019 年將占據(jù)半壁江山。研究表明，酪氨酸酶是人體內(nèi)參與黑色素合成的關鍵酶，因此可通過抑制 酪氨酸酶的活性來阻斷黑色素生成，從而達到美白效果。帶有酚羥基的化合物( 如間苯三酚、4-硝基愈 創(chuàng)木酚、酚酞、地樂酚) 因具有與酪氨酸相似的結(jié)構(gòu)特征，多用作酪氨酸酶的抑制劑，從而起到一 定的美白效果。但間苯三酚具有致敏性，可引起嘔吐等急性中毒。酚酞會引起口腔炎癥。4-硝基愈創(chuàng) 木酚和地樂酚對皮膚均有一定的刺激性，且地樂酚有劇毒。

高效液相色譜儀: 配二極管陣列檢測器( 1260，美國安捷倫科技公司) ; 分析天平: 感量 0. 01 g ( M22002 /02，瑞士梅特勒托利多公司) 和 0. 1 mg( XP105，瑞士梅特勒托利多公司) ; 渦旋振蕩器( MS3 型，德國艾卡公司) : 最高轉(zhuǎn)速不低于 3 000 r/min; 離心機( KDC － 40，科大中儀公司) : 最高轉(zhuǎn)速不 低于 4 000 r/min; 超聲波清洗儀( KQ-500DE，昆山市超聲儀器公司) ; 氮吹濃縮儀( N － EVAP 112，美 國 Organomation 公司) ; 超純水儀( PUＲELAB Pulse，英國 ELGA 公司) 。 間苯三酚、地樂酚、4-硝基愈創(chuàng)木酚和酚酞標準品( 純度大于 96% ，德國 Dr. Ehrenstorfer 公司) ; 乙腈( 色譜純，美國 Fisher 公司) ，甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯化鈉、四氫呋喃、磷酸、乙酸銨( 分析 純，廣州化學試劑廠) ，超純水( 18. 2 MΩ·cm) 。

用 1 mL 丙酮溶解適量的間苯三酚、地樂酚、4-硝基愈創(chuàng)木酚和酚酞標準品，再用乙腈配成質(zhì)量濃 度為 5 000. 0 mg /L 的單標標準貯備液。分別吸取4 種化合物單標貯備液各 2 mL，用乙腈定容至10 mL， 配成質(zhì)量濃度為 1 000. 0 mg /L 混合標準中間液，置于 4 ℃避光保存。臨用前，用乙腈將混合標準中間 液逐級稀釋至所需濃度的系列標準工作溶液。

稱取試樣0. 2 g( 精確至0. 01 g) 于15 mL 具塞塑料離心管中，加 入2. 0 mL 提取溶劑( 水基類: 乙酸乙酯; 膏霜類: 甲醇; 乳液類、粉類: 甲醇 + 丙酮( 1 ∶ 1，體積比) ) ，3 000 r/min 渦旋振蕩2 min。粉類化妝品提取液11 000 r/min 離心3 min，取上清液過 0. 45 μm 濾膜，待測定。 水基類、膏霜類和乳液類化妝品則取提取液上清層，40 ℃氮吹至干。依次加入100 μL 乙腈和900 μL 水，分 別渦旋復溶取出，合并溶液，11 000 r/min 離心3 min，取上清液過0. 45 μm 濾膜，待測定。

稱取試樣0. 1 g( 精確至0. 01 g) 于15 mL 具塞塑料離心管中，加入1 mL 四氫呋喃，渦 旋溶解后加入 2 mL 甲醇，3 000 r/min 渦旋振蕩 2 min，4 000 r/min 離心 3 min，取上清液，40 ℃ 氮吹 至干，依次加入 100 μL 四氫呋喃和 900 μL 甲醇 + 丙酮( 1 ∶ 1) 溶劑，分別渦旋復溶取出，合并溶液， 11 000 r/min 離心 3 min，取上清液過 0. 45 μm 濾膜，待測定。1. 4 色譜條件 色譜柱: Diamonsil C18柱，5 μm，250 mm × 4. 6 mm( i. d． ) ; 流速: 0. 8 mL/min; 流動相 A: 乙腈，B: 10 mmol/L 乙酸銨( 含0. 2%磷酸) ; 流動相梯度: 0 ～1 min，10%A; 1 ～5 min，10%～25%A; 5 ～7 min，25% ～40%A; 7 ～9 min，40%～70%A; 9 ～12 min，70%A; 12 ～15. 01 min，70%～95%A; 15. 01 ～17 min，95%A; 17 ～17. 01 min，95%～10%A; 17. 01 ～20 min，10%A; 柱溫: 40 ℃; 檢測波長: 230 nm; 進樣量: 10 μL。

比較了分別以乙腈 + 水和乙腈 + 10 mmol /L 乙酸銨為流動相時 4 種酚類的分離效果。結(jié)果表明，4 種酚類在乙腈 + 10 mmol /L 乙酸銨的流動相體系中可獲得更好的分離度，但地樂酚的峰形較差，這是由于酚羥基易解離出氫離子，離子態(tài)的地樂酚易導致其色譜峰展寬。通過加入 0. 2% 磷酸，調(diào)節(jié)溶液 pH 值至3. 0，地樂酚在此緩沖鹽體系下呈分子態(tài)，經(jīng) C18柱分離后峰形尖銳、對稱。綜合考慮，選擇乙 腈 + 10 mmol /L 乙酸銨( 含 0. 2% 磷酸) 為流動相體系。液相色譜通常采用梯度洗脫以使復雜樣品中 的各組分能按各自適宜的容量因子( k) 達到良好 的分離效果。本實驗考察了乙腈 + 10 mmol /L 乙 酸銨( 含 0. 2% 磷酸) 為流動相的梯度洗脫程序。 按 “1. 4”的優(yōu)化梯度洗脫程序可使 4 種酚類物 質(zhì)達到基線分離。樣品經(jīng)溶劑萃取后，為提高檢測靈敏度，將待測液 40 ℃氮吹至干后選用合適的溶劑進行復溶，定 容至 1 mL 待測。針對水基類、乳液類和膏霜類化妝品，考察了乙腈、甲醇、乙腈 + 水( 1 ∶ 9) 3 種溶劑 的復溶效果。結(jié)果顯示，采用單純有機相進行復溶時，間苯三酚的色譜出峰時間前移，色譜響應低。 選擇乙腈 + 水( 1 ∶ 9) 混合溶劑進行復溶時，間苯三酚的色譜出峰時間無漂移，且色譜峰響應高，但地 樂酚的色譜峰響應降低至純?nèi)軇┨崛r的 20% 以下。采用優(yōu)化方法對 4 種酚類物質(zhì)進行線性與靈敏度考察，并分別按信噪比( S /N) 為 3 和 10 計算檢出 限( LOD) 和定量下限( LOQ) 。以目標化合物濃度( x，mg /kg) 為橫坐標，響應值的峰面積( y) 為縱坐標 建立標準曲線，計算目標化合物的線性范圍、線性方程及相關系數(shù)。結(jié)果顯示，4 種待測物在 5 ～ 500 mg /kg 范圍內(nèi)線性良好，r 2 ＞ 0. 99，LOD 為 1. 5 ～ 6. 0 mg /kg，LOQ 為 5. 0 ～ 20. 0 mg /kg。隨機抽取市售的 31 個化妝品，其中水基類化妝品 6 個，乳液類化妝品 8 個、膏霜類化妝品 10 個、 粉類化妝品 4 個、蠟基類化妝品 3 個，按本方法進行檢測，31 個化妝品均未檢出間苯三酚、4-硝基愈 創(chuàng)木酚、酚酞及地樂酚。

建立了化妝品中禁用的間苯三酚、4-硝基愈創(chuàng)木酚、酚酞和地樂酚的檢測方法。樣品經(jīng)溶 劑提取、氮氣吹干、復溶后采用高效液相色譜法測定，外標法定量。本方法前處理簡單、靈敏度高， 適用于水基類、乳液類、膏霜類、粉類及蠟基類化妝品中地樂酚等 4 種禁用物質(zhì)的檢測。



 

免責聲明：文章僅供學習和交流，如涉及作品版權(quán)問題需要我方刪除，請聯(lián)系我們，我們會在第一時間進行處理。