半夏為天南星科多年生植物半夏 Pinellia ternata ( Thunb. ) Breit. 的干燥塊莖,主要分布在我國 長江流域、黃河中下游、淮河流域等廣大地區,作 為常用中藥,收載于厲版《中國藥典》中。半夏最早 出現在《禮記·月令》中,而入藥首見于《五十二病 方》,距今已 2100 多年歷史。具有燥濕化痰、消 痞散結等功效。藥典記載用于濕痰寒痰,咳喘痰 多,痰飲眩悸,風痰眩暈,痰厥頭痛,嘔吐反胃,胸脘 痞悶,梅核氣,外治癰腫痰核。
Agileng 1260 型高效液相色譜儀 ( G4212B 型 DAD 檢 測 器,G1312B 型 二 元 泵, G1367E 型高性能自動進樣器,G1322A 型脫氣機, G1316A 型柱溫箱) ; AX224ZH /E 型萬分之一電子 分析天平: 常州奧豪斯儀器有限公司; bp211d 型十 萬分之一電子分析天平: 德國賽多利斯; KQ - 1000 型醫用超聲波清洗器: 昆山舒美超聲儀器有限公司。
鳥苷( 批號: 118 - 00 - 3) 、尿苷( 批號: 58 - 96 - 8) 、腺苷( 批號: 58 - 61 - 7) 、胞苷( 批號: 65 - 46 - 3) 、胸苷( 批號: 50 - 89 - 5) 、黃嘌呤( 批 號: 69 - 89 - 6) 、腺嘌呤( 批號: 73 - 24 - 5) 、尿嘧啶 ( 批號: 66 - 22 - 8) 、次黃嘌呤( 批號: 68 - 94 - 0) 、 次黃嘌呤核苷( 批號: 58 - 63 - 9) : 均購自南京良緯 生物科技有限公司,純度均≥98% ; 甲醇: 德國 Merck 公司,為色譜純; 水為純凈水; 其他試劑均為分 析純。
樣品由安徽萬生中藥飲片有限公司、安 徽井泉中藥飲片有限公司、安徽協和成中藥飲片有 限公司、四川源地中藥材種植有限公司、甘肅春福 中藥材種植有限公司、貴州同德中藥飲片有限公 司、四川新荷花中藥飲片有限公司幫助收集,21 份 不同產地的半夏樣品,均由江蘇省中醫院朱育鳳主 任中藥師鑒定為天南星科植物半夏 Pinellia ternata ( Thunb. ) Breit. 的干燥塊莖。見表 1。
色譜柱: Agilent Eclipse XDB - C184. 6 mm × 250 mm、5 μm) ; 流動相: 甲醇( A) - 水 ( B) ; 梯度洗脫( 0 ~ 7 min,2 % A; 7 ~ 13 min, 3 % A; 13 ~ 25 min,20 % A; 25 ~ 30 min,2 % A; ) ; 流速: 1 mL·min - 1 ; 柱溫: 35 ℃ ; 檢測波長: 260 nm; 進樣量: 20 μL。
取約 2. 0 g 半夏粉末 ( 過 4 號篩) ,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,加入石 油醚( 30 ~ 60 ℃ ) 30 mL,超聲 30 min( 功率 280 W, 頻率53 kHz) ,放冷后,揮去石油醚,精密加入 25 mL 純水,精 密 稱 定,超 聲 45 min ( 功 率 280 W,頻 率 53 kHz) ,放冷,再稱定重量,用水補足減失重量,搖 勻后過濾,取續濾液經 0. 45 μm 微孔濾膜過濾,即 得供試品溶液。
精密稱定適量尿 嘧啶、胞苷、次黃嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鳥苷、胸 苷、腺苷對照品,加適量溶劑溶解后,制成濃度分別 為 1. 125、1. 27、1. 265、1. 29、1. 335、1. 38、1. 375、 1. 31、0. 295 g / L 的對照品儲備液。
取“2. 2. 2”項下混合對照品 溶液,混合后按比例逐步稀釋,得到 6 個不同濃度的 混合標準品溶液,按“2. 1”項下色譜條件進樣并記 錄峰面積,以色譜峰面積積分值( y) 為縱坐標,濃度 ( x,mg·L - 1 ) 為橫坐標進行線性回歸,得到各核苷 成分的回 歸 方 程 和 線 性 范 圍。線性回歸結果見 表 2。
不同產地半夏 8 種核苷成分的含量測定結果 與聚類分析,湖南新寧半夏中的 8 種 核苷成分平均總含量( 0. 1459 % ) 高于其它產區種 植的半夏( 河南洛寧、甘肅清水、甘肅西和、四川成 都、貴州、安徽阜南、四川南充及湖北宜昌的半夏中 8 種核苷平均總含量分別為 0. 1377% 、0. 1227% 、 0. 11535% 、 0. 1074% 、 0. 1026% 、 0. 1026% 、 0. 1025% 、0. 0845 % ) ; 其中 2、5、6、13、14、17 號樣 品未檢測出肌苷含量; 8 號及 17 號樣品未檢測出腺 嘌呤含量; 實驗過程中雖然檢測出各樣品中含有腺 苷成分,但不明原因導致其穩定性不佳,故未納入 含量測定統計與加樣回收率試驗中。聚類分析表 明,貴州赫章與其余產地半夏核苷含量上差異很 大,河南洛寧與湖南新寧、安徽阜南與湖北宜昌、甘 肅西和與貴州凱里、甘肅清水與貴州劍河差異較小。實驗對比了乙腈 - 水、乙 腈 - 0. 05 % 磷酸水、甲醇 - 水、甲醇 - 乙腈 - 磷酸二氫鈉、醋酸銨 - 甲醇為流動相進行 梯度洗脫,發現當流動性為甲醇 - 水時,在 260 nm 吸收波長下,各核苷組分峰型及分離度較好,故最 終選用甲醇 - 水作為流動相。
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