紫草 (Arnebia euchroma) 為我國傳統常用中 藥,始載于《神農本草經》,列為中品,多用于濕 疹、水火燙傷、麻疹不透等癥。臨床上常用于治療 皮膚病、慢性腎炎、燒燙傷、靜脈炎等。《中國藥 典》2015 年版規定,紫草為新疆紫草(Arnebia eu- chroma(Royle)Johnst)或內蒙紫草(Arnebia. guttata Bunge)的干燥根,其中,以新疆紫草質量較優。研 究表明,新疆紫草含有多種活性成分,主要包括萘 醌類、生物堿、黃酮類、有機酸及多糖等;具有廣 泛的抗病毒作用、抗氧化活性、免疫調節及抗腫瘤 活性;以紫草素為代表的萘醌類成分為其主要 活性成分。
目前,紫草中總萘醌類成分的提取方法有超臨 界 CO2 萃取法、超聲提取法、溶劑浸提法、減壓蒸餾 法等。但是各種方法之間的提取效率、有效成分的 穩定性等方面存在差異。
為了篩選新疆紫草中總萘醌類化合物較為理 想的提取方法,本研究對回流提取法、滲漉提取法、 超聲提取法進行了比較研究。
UV-1800 紫外 - 可見分光光度儀(日本島津公司),Secura324-1CN 電子分析天平(賽多利斯),HH-S4 數顯恒溫水浴鍋(金壇市醫療器械廠),KQ-1000E落地式超聲波清洗機(昆山舒美超聲儀器有限公司);電熱恒溫干燥箱、旋轉蒸發儀、恒溫水浴鍋(上海百典 儀器有限公司)。
供試新疆紫草購自山西省藥材公司,并經鑒定 為 Arnebia euchroma(Royel)Johnst。左旋紫草素對 照品購自中國藥品生物制品檢定所,其余所用試劑 均為分析純。
1.3.1 新疆紫草粗粉制備 取新疆紫草藥材于 60 ℃ 烘箱中干燥至恒質量,粉碎后,過篩(2 mm)備用。
1.3.2 提取方法
1.3.2.1 回流提取法 稱取粗粉 50.00 g,60 ℃分別加 8 倍和 6 倍 95%乙醇回流 2 次,時間分別為 2,1 h, 合并提取液,回收乙醇至浸膏狀,冷凍干燥,得干 膏備用。
1.3.2.2 滲漉提取法 稱取粗粉 50. 00 g,加 8 倍量 95%乙醇浸泡過夜,以 1 mL/min 流速進行滲漉,回 收乙醇至浸膏狀,冷凍干燥,得干膏,備用。
1.3.2.3 超聲提取法 稱取粗粉 50.00 g,分別加 8 倍 和 6 倍 95%乙醇超聲 2 次,每次 30 min,合并提取 液,回收乙醇至浸膏狀,冷凍干燥,得干膏備用。
1.3.3 標準曲線制備 精密稱取左旋紫草素對照 品 2.5 mg,置于 50 mL 容量瓶中,無水乙醇溶解定 容,即得質量濃度為 0.05 mg/mL 的對照品溶液。
分別精密量取對照品液 1,2,3,4,5 mL 置于 10 mL 容量瓶中,無水乙醇定容。采用紫外 - 可見 分光光度法,在 516 nm 處測定吸光度。
精密稱量不同提取方法 獲得的干膏 0.05 g,置 50 mL 容量瓶中,無水乙醇定 容,溶解過濾。量取濾液 5 mL,置 25 mL 容量瓶中, 無水乙醇定容,搖勻,即得樣品供試液。精密吸取上 述樣品供試液 1 mL,在線性關系下測定吸光度,并 計算出樣品中總萘醌的含量。
選擇總萘醌類得率最高的方 法,同時制取 5 份樣品溶液,連續測定其吸光度,計 算 RSD,考量其精密度。
選擇總萘醌類得率最高的方 法,精密量取樣品溶液 1 mL,每隔 30 min 重復測定 總萘醌含量,連續 5 h,計算 RSD,考察其不同時間 點的穩定性。
2.1 標準曲線制備 以吸光度(A) 為縱坐標,左旋紫草素對照品 (C)質量濃度(mg/mL)為橫坐標進行回歸分析,得 標準曲線方程為:A=25.092 4C-0.004 1,r=0.999 6, 在 5~25 mg/L 質量濃度范圍內,二者的線性關系 良好。
2.2 不同提取方法總浸膏得率及總萘醌含量比較 由表 1 可知,在 3 種方法中,總萘醌含量從大 到小依次為超聲提取法、回流提取法、滲漉提取法。
提取方法 | 總浸膏得率 | 總萘醌含量 |
回流提取法 | 7.73 | 3.46 |
滲漉提取法 | 8.41 | 3.42 |
超聲提取法 | 7.06 | 3.95 |
2.3 精密度試驗分析 采用超聲提取法提取 5 份樣品溶液,以吸光度 計算,RSD 為 2.61%,說明精密度良好。
2.4 穩定性試驗分析 采用超聲提取法,每隔 30 min 連續 5 h 重復測 定總萘醌含量,其 RSD 為 1.86%,說明提取液在 5 h 內穩定性良好。
紫草中總萘醌類成分脂溶性強,易溶于石油 醚、氯仿等有機溶劑,可溶于乙醇,微溶于水。在 測試過程發現,回流提取法在提取過程中,有效成 分損失較大。這與萘醌類成分不穩定,對光、熱等敏 感,其穩定性受溫度影響較大有關。
滲漉提取法的總浸膏得率最高,超聲提取法的 總萘醌含量最高。采用滲漉提取法,雖然總萘醌類 成分不是最高,但總浸膏得率較高。綜合比較,滲漉 法作為紫草中總萘醌類成分初始提取方法,可以有 效節約能源,且具有設備要求低、操作簡便等優點, 較適用于工業化量產。
相對于傳統的提取方法,超聲提取法獲得的總 萘醌類成分含量最高,研究表明,超聲波法無需加 熱、加壓,可以縮短提取時間,降低成本,提高生產 效率,但對設備要求較高。目前,雖然滲漉提取法 在工業化中使用較為普遍,但由于超聲提取法在減 少有機溶劑使用、降低環境污染等方面的優勢,決 定其在未來工業化方面具有廣闊的應用前景。因 此,超聲法提取紫草有效成分的工藝條件值得進一 步研究。