鼠曲草為菊科植物鼠曲草 Gnaphlium affine D. Don 的全草,具有祛痰、止咳、平喘、祛風濕等功 效,主要活性成分有黃酮類、二萜類、有機酸類 等,鼠曲草有降血壓、降尿酸等藥理作用,且藥食 兩用,具有較大的研究價值和開發潛力。鼠曲草的 多成分、多功效的作用特點,單一成分難以反應其 內在質量。因此,應選擇多成分、多指標的測定方 法,對與其功效相關的化學成分進行全面綜合的評 價。2006 年,王智民提出了一種新的評價中藥內在 質 量 模 式 , 即 一 測 多 評 法(quantitative analysis of multi-components by single marker,QAMS)。QAMS 以樣品中某一成分為內參物,建立該成分與其他成 分間的相對校正因子,通過相對校正因子計算其他 成分的含量。該方法具有快速、簡便并能同時實現 多成分同步測定等優點。本實驗采用 QAMS 技 術,以綠原酸為內參物,測定鼠曲草中的咖啡酸、 異毛蕊花糖苷和異澤蘭黃素的相對校正因子,建立 鼠曲草藥材的 QAMS 方法,以期為鼠曲草質量控制 提供新的評價模式。
Shimadzu LC-2010AHT 高效液相色譜系統 (日本島津公司);Agilent 1220 液相色譜儀系統(美 國安捷倫公司);色譜柱:Agilent HC-C18(4.6 mm × 250 mm,5 μm),UItisiITMAQ-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm),Inertsil ODS-3(4.6 mm× 250 mm,5 μm); BS210S 萬分之一分析天平(德國 Sartorious 公司); KQ-250D 型數控超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。
鼠曲草采集于漢中連城山及購買于江西、福建、云南,經西安醫學院張寒副教授鑒定 為菊科鼠曲草屬鼠曲草 Gnaphlium affine D. Don 的全 草;綠原酸(成都艾科達化學試劑有限公司,批號: MUST-12031401,純度≥98%);咖啡酸(西安開來生 物工程有限公司;批號:K120711,純度≥98%);異 毛蕊花糖苷和異澤蘭黃素(成都埃法生物科技有限公 司,批號:AF8032807,AF7112223,純度≥98%)。 乙腈、甲醇均為色譜純;其余試劑均為分析純。水 為娃哈哈飲用純凈水。
色譜柱:Agilent HC -C18(4.6 mm × 250 mm,5 μm);檢測波長 360 nm;柱溫 27 ℃;體 積流量 1 mL·min- 1 ,進樣量 10 μL;流動相為乙腈 (A)-0.2%磷酸水(B),梯度洗脫(0~8 min,6%~ 15% A; 8~30 min, 15% ~20% A; 30~33 min, 20%~30% A;33~60 min,30%~40% A)。在上述 色譜條件下,各組分分離度良好,樣品和標準品色 。
分別取綠原酸、異毛 蕊花糖苷和異澤蘭黃素對照品 5 mg,咖啡酸對照品 10 mg,精密稱定,分別置于 10 mL 容量瓶中,加甲 醇溶解,定容至刻度,配制成質量濃度為綠原酸 0.52 mg·L- 1 、咖啡酸 1.06 mg·L- 1 、異毛蕊花糖苷 0.53 mg·L-1 和異澤蘭黃素 0.50 mg·L-1 。分別精密量 取 1 mL 上述各對照品溶液置于 10 mL 容量瓶,加甲醇 定容至刻度,配制成質量濃度為綠原酸 0.052 mg·L-1 、 咖啡酸 0.106 mg·L-1 、異毛蕊花糖苷 0.053 mg·L-1 和異澤蘭黃素 0.050 mg·L-1 的混合對照品溶液。
鼠曲草藥材干燥粉碎后取 粉末 0.1 g,精密稱定,置 25 mL 容量瓶中,加入 20 mL 的甲醇超聲處理 15 min 后,取出放涼后定容 至刻度,取上清液過 0.45 μm 濾膜,即得。 2.2.3 線性關系考察 精密吸取上述混合對照品溶液 0.4、1、2、3、4 mL 分別放置在 10 mL 的容量瓶 中,用甲醇定容后分別進樣,以進樣量對峰面積積 分值進行回歸處理,得到綠原酸、咖啡酸、異毛蕊 花糖苷和異澤蘭黃素的標準曲線。
鼠曲草含黃酮類、二萜類、有機酸類等活性成 分,其中綠原酸具有抗氧化、抗菌、抗癌、降血 脂、降血糖等藥理作用;咖啡酸具有抗氧化、升血 小板、抗血小板凝集、抗氧化、抗腫瘤和腦保護作 用[6] ;異毛蕊花糖苷有抗氧化、抗溶血、抑制血管緊 張素轉化酶及抗高血壓的活性 ;異澤蘭黃素有抗胃 腫瘤、抗氧化的作用。因此本研究選擇這 4 種化合 物作為鼠曲草質量評價的指標。綠原酸在鼠曲草中 化學性質相對穩定且含量相對較高,對照品價廉易 得,其提取分離純化工藝相對成熟,故選用其做為 內參物。本研究分別考察了不同的色譜柱及色譜儀 對相對校正因子、相對保留時間的影響,實驗結果 表明,咖啡酸、異毛蕊花糖苷、異澤蘭黃素的相對 校正因子的重現性較好。同時采用外標法測定了鼠 曲草中咖啡酸、異毛蕊花糖苷、異澤蘭黃素的含 量,比較外標法和一測多評法所得含量的結果,發 現兩種方法得出的結果無顯著性差異。說明本實驗 計算得到的相對校正因子可以作為一個穩定的參數 運用于鼠曲草各成分的含量計算。