博落回[Macleaya cordata（Willd）R.Br.]是罌粟科博 落回屬多年生草本植物，全草入藥，在我國主要集中分 布于江蘇、浙江、云南、貴州、湖南、湖北、廣西、廣東及臺 灣等地區(qū)。博落回富含生物堿，至今已被分離并鑒定 的單體生物堿達74個，其中含量最高且生物活性較強的 為苯并異喹啉類生物堿，主要包括血根堿、白屈菜紅堿、 原阿片堿和別隱品堿等 。其中，血根堿具有明顯的抗 菌、抗腫瘤以及保肝護肝等藥理活性 。在歐美和日 本等發(fā)達國家，血根堿常作為抗菌藥物的替代品被廣泛 用于畜牧業(yè)及魚類養(yǎng)殖。目前，我國對于高純度的 血根堿尚無便捷、高效的規(guī)模化分離純化方法。

1 材料

1.1 儀器

1260 型高效液相色譜（HPLC）儀（美國 Agilent 公 司）；APPS10D型制備液相色譜儀、Φ15 mm型GCC可壓 縮玻璃柱（蘇州利穗科技有限公司）；ME215S型電子天 平、PB-10型pH計（德國Sartorius公司）；MP2002型電子 天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）；N-1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）；SHZ-82 型恒溫振蕩 器（金壇市富華儀器有限公司）；DZF型電熱恒溫真空干燥箱（上海邁捷實驗設備有限公司）；Simplicity UV型超 純水機（德國Millipore公司）；KQ-250E型醫(yī)用超聲波清 洗器（昆山舒美超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

血根堿對照品[本實驗室自制，批號：20170501，純 度：97.1％（按HPLC測定、歸一化法計算）]；CM-FF型弱 陽離子交換樹脂、SP-HP 型強陽離子交換樹脂[博格隆 （上海）生物技術有限公司]；CGC100×4型弱陽離子交換 樹脂、PCG600F型反相樹脂、PCG900F型反相樹脂[漂萊 特（中國）有限公司]；S40型強陽離子交換樹脂（蘇州賽 分科技有限公司）；PIPO-02型大孔吸附樹脂（廣州牌牌生物科技有限公司）；SP50型強陽離子交換樹脂（蘇州知 益微球科技有限公司）；C18制備級填料（75 μm，日本 Cosmosil 公司）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純， 水為純凈水。

1.3 藥材

博落回藥材購自湖南，經(jīng)蘇州大學藥學院陸葉副教 授鑒定為罌粟科植物博落回（Macleaya cordata）的果莢。

2 方法與結(jié)果

色譜柱：Cosmosil C18-R-Ⅱ（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.2％醋酸溶液（25 ∶ 75， V/V）；流速：1 mL/min；檢測波長：270 nm；柱溫：30 ℃；進 樣量：20 μL。在該色譜條件下，血根堿與相鄰峰的分離 度均大于1.5，理論板數(shù)大于5 000（圖略）。精密稱定血根堿對照品 12.86 mg，置于 50 mL 量瓶中，加入甲醇適量，超聲（功 率：250 W，頻率：40 kHz，下同）使其完全溶解后定容，搖 勻，即得。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，制得系 列質(zhì)量濃度的線性對照品溶液。取上述稀釋溶液與原 未經(jīng)稀釋的對照品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件分別進 樣測定。以血根堿質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標、峰面 積（y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為：y＝ 101.07x－398.04（r＝0.999 2，n＝3）。結(jié)果表明，血根堿 質(zhì)量濃度在25.72～257.2 μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好取已知含量的博落回提取物 樣品 12 mg，共 6 份，精密稱定，分別加入質(zhì)量濃度為 1.528 mg/mL 對照品溶液（按“2.1.2”項下方法制備）2 mL，記錄峰面積，按標準曲線法計算 含量并計算加樣回收率。結(jié)果，平均加樣回收率為98.2％（RSD＝1.06％，n＝6），表明方法準確度良好。

3 討論

在已往相關研究中，對博落回生物堿的分離提取多 針對的是生物總堿混合物 ，而對于其單體生物堿的分 離純化則鮮見報道。離子交換樹脂具有成本低、性能穩(wěn) 定、分離速度快、環(huán)境污染少、可再生和反復使用的優(yōu) 勢，廣泛應用于化工生產(chǎn)、食品工業(yè)、制藥工業(yè)和環(huán)保等 領域。本研究首次采用以瓊脂糖為基質(zhì)的軟膠 CM-FF型弱陽離子交換樹脂對博落回提取物進行分離 純化，并以反相C18制備柱進行脫鹽及進一步純化，最終 得到純度為97％的血根堿產(chǎn)物，純化收率為71％。該工 藝穩(wěn)定高效，為血根堿的開發(fā)和應用研究奠定了基礎。