黃曲霉毒素(aflatoxins, AFs)是黃曲霉和寄生曲霉等某 些菌株產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物, 主要包括黃曲霉毒素 B1 (aflatoxin B1, AFB1)、黃曲霉毒素 B2 (aflatoxin B2, AFB2)、黃 曲霉毒素 M1 (aflatoxin M1, AFM1)、黃曲霉毒素 M2 (aflatoxin M2, AFM2)、黃曲霉毒素 G1 (aflatoxin G1, AFG1)、黃曲霉毒 素 G2 (aflatoxin G2, AFG2)等多種毒素。Waters-Xevo-TQ-MS 超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì) 譜儀、Waters ACQUITY UPLC BEH C18 色譜柱(50 mm× 2.1 mm, 1.7 μm)(美國 Waters 公司); 3 mL-25 T 黃曲霉毒素 B1 免疫親和柱(天津賽奧斯生物科技有限公司); KQ-500E 超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司); Milli-Q 去離子水發(fā)生 器(美國 Millipore 公司); CR21GIII 大容量高速離心機(日 本 Hitachi 公司); QL-866 渦旋混合儀(海門市其林貝爾儀 器制造有限公司); HH-100 恒溫混勻儀(杭州佑寧儀器有限公司)。

    免疫磁性微球是基于抗原抗體特異性結(jié)合進行富集凈 化, 因此抗原和抗體的結(jié)合條件直接影響微球的富集凈化 效果。基抗原和抗體的結(jié)合反應(yīng)通常 在 pH 為 6~8 時效果最好, pH 過高或過低都將影響抗原與抗 體的結(jié)合能力, 目前常用抗原、抗體反應(yīng)的 pH 為 7.4, 因此 在后續(xù)的實驗中也選擇 pH=7.4 的 PBS 作為反應(yīng)緩沖 溶液。對于抗原和抗體的結(jié)合溫度, 通常抗原與抗體結(jié)合溫 度范圍在 15~40 °C 間, 溫度過高會影響抗體活性, 本研究 選擇 37 °C 作為抗原抗體結(jié)合的反應(yīng)溫度。在以上條件下, 本研究從免疫磁性微球的用量、提取時間、洗脫體積與洗脫 時間 4 個方面對方法進行優(yōu)化。