云南重樓（又名滇重樓）Paris polyphylla Smith var. yunnanensis (Franch.) Hand. -Mazz. 為百合科 （Liliaceae）多年生草本植物，以其干燥根莖入藥，被 歷版《中國藥典》收錄，甾體皂苷類成分是其主要活 性成分，具有消腫止痛、清熱解毒、涼肝定驚等功 效，在云南省藥用植物資源中占據(jù)產(chǎn)業(yè)化利用主導(dǎo) 地位，是最具代表性和全局影響力的植物資源之一。 目前，滇重樓藥材的來源主要以采挖野生資源為主， 由于每年的消耗量遠遠超出野生資源的年再生能力， 加之滇重樓根莖生長極其緩慢，資源再生周期長（需 要 8～12 年），野生資源利用已經(jīng)演變成為嚴重的資 源危機，滇重樓資源的可持續(xù)利用問題已經(jīng)引起政 府、科研院所和相關(guān)制藥企業(yè)的高度關(guān)注和重視。 筆者前期在滇重樓樣品采集及研究中發(fā)現(xiàn)，在滇 西大理、麗江等滇重樓主要原料來源地，根據(jù)根狀莖 分枝情況不同滇重樓存在 2 種不同形態(tài)，一種是根狀 莖不分枝，另一種是《云南植物志》和《中國植物志》 沒有記載，根狀莖常分枝，少則根狀莖分為幾枝， 多則根狀莖分為幾十、上百枝，產(chǎn)地俗稱多莖重樓、 多芽重樓。多莖重樓與滇重樓相比，多莖重樓因為根 狀莖分枝多，葉片數(shù)多，葉面積大，光合作用能力強， 生長速度快，產(chǎn)量高，深受種植戶的歡迎，已經(jīng)成為 滇重樓野生變家種及人工種植的重要品種。目前國內(nèi) 外有關(guān)重樓藥材的品質(zhì)評價主要集中在滇重樓和七 葉一枝花 Paris polyphylla Smith var. chinensis (Franch.) Hara，有關(guān)多莖重樓品質(zhì)評價的研究報道較少，多莖重樓與滇重樓在根狀莖分枝上差異較大， 那么，二者在主要活性成分上是否存在差異？為此， 本實驗擬采用 HPLC 法測定不同產(chǎn)地多莖重樓根莖 中重樓皂苷 VII、H、VI、II、III、I、V 的含量測定， 建立其 HPLC 指紋圖譜，并與滇重樓對照藥材根莖 HPLC 指紋圖譜進行比較分析，探討不同產(chǎn)地多莖重樓與滇重樓品質(zhì)及 HPLC 指紋圖譜差異，為多莖重樓 與滇重樓等同入藥提供依據(jù)。

Agilent 1260 型高效液相色譜儀（美國 Agilent 公 司）：包括 G1311CVL（四元泵）、G1313A（標準型自動進樣器）、G1330B（自動進樣器恒溫模塊）、 G1316A，G1316C（柱溫箱）、G1314BC/E/F DAD 檢 測器，ChemStation 色譜工作站（美國 AgIlent 公司）；超聲波清洗儀（昆山超聲儀器）；FY131 型中藥粉碎機（天津市泰斯特儀器公司）；電子天平（德國賽多利斯）。

重樓皂苷 VII、VI、II、I 對照品購自中國食品 藥品檢定研究院，批號分別為 111593-200402、 111592-200301、111591-200301、111590-200402， 質(zhì)量分數(shù)均≥98%；重樓皂苷 H、III、V 對照購自 上海金德生物科技有限公司，批號分別為 20170109、20180606、20170217，質(zhì)量分數(shù)均≥98%。 高效液相流動相乙腈為色譜純（美國 Tedia 公司）， 水為娃哈哈純凈水，提取樣品用乙醇為分析純。 2017 年 9 月種子成熟期，在多莖重樓和滇重樓 主要來源地采集樣品，多莖重樓樣品采集根狀莖分 枝數(shù)為 8～10 枝的植株（生長年限相近），滇重樓樣 品采集根狀莖節(jié)數(shù)為 8～9 個（生長年限相近）。樣 品經(jīng)大理大學(xué)李海峰教授鑒定為百合科（Liliaceae） 重樓屬 Paris L. 滇重樓 Paris polyphylla Smith var. yunnanensis (Franch.) Hand. -Mazz.。分別到不同產(chǎn)地 采集多莖重樓 10 批（S1～S10）和滇重樓 11 批（A1～ A11），樣品去泥洗凈后于 40 ℃烘箱中恒溫干燥至 恒定質(zhì)量備用，并將 11 批滇重樓作為對照藥材。多 莖重樓及滇重樓樣品信息見下表。

理 60 min，濾過，加 75%乙醇定容至刻度，得供試 品溶液。 2.1.4 專屬性考察 在“2.1.1”項色譜條件下， 分別取對照品溶液和供試品溶液進樣測定，得到 特征峰，供試品溶液與雜質(zhì)分離良好，無干擾。2.1.5 線性關(guān)系考察 將對照品母液在“2.1.1”項 色譜條件下，分別進樣 1、5、10、15、20、25 μL， 分別測定重樓皂苷 VII、H、VI、II、III、I、V 對照 品峰面積。以對照品進樣量對峰面積進行線性回 歸，繪制標準曲線，得到回歸方程。同時以信噪比 3 和 10 為標準考察檢測限（LOD）和定量限（LOQ）。 2.1.6 精密度試驗 取“2.1.2”項中的對照品溶液 在“2.1.1”色譜條件下，每次進樣 10 μL，重復(fù)進 樣 6 次，測得重樓皂苷 VII、H、VI、II、III、I、V 的平均峰面積分別為 141.85、179.63、107.75、321.20、 263.43、257.55、229.15，RSD 分別為 0.66%、0.53%、 0.98%、0.86%、0.85%、0.65%、0.70%（n＝6），結(jié) 果表明精密度良好。

色譜柱為 Thermore C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相為水（A）-乙腈（B），梯 度洗脫，0～8 min，20%～40% B；8～39 min，40%～ 44% B；39～49 min，44%～47% B；49～52 min， 47%～60% B；52～60 min，60%～20% B；檢測波 長 203 nm；柱溫 30 ℃；體積流量 1 mL/min；進樣 量 10 μL。 2.1.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取重樓皂 苷 VII、H、VI、II、III、I、V 對照品，置 5 mL 量 瓶中，加色譜甲醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度分 別為 0.236、0.238、0.240、0.650、0.736、0.660、 0.248 mg/mL 對照品母液，在 4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?2.1.3 供試品溶液的制備 樣品粉碎，過 100 目篩， 40 ℃烘箱中干燥至恒定質(zhì)量，精密稱取藥材粉末 0.5 g（萬分之一電子天平）于 10 mL 三角瓶中，加 入 75%乙醇 4 mL，于 60 ℃，53 kHz 超聲處理 60 min，濾過，濾液置于 10 mL 量瓶中；向藥材濾渣 中加 75%乙醇 4 mL，放置過夜，相同參數(shù)超聲處。

不同產(chǎn)地多莖重樓根莖主要活性成分含量比 較分析 不同產(chǎn)地多莖重樓根莖中 VII、H、VI、II、III、 I、V 及《中國藥典》2015 年版規(guī)定 4 種重樓皂苷 （I、II、VI、VII）的總含量，。對不同產(chǎn)地 的多莖重樓根莖中重樓皂苷 VII、H、VI、II、III、 I、V 及《中國藥典》2015 年版規(guī)定的 4 種重樓皂 苷（I、II、VI、VII）總量進行顯著性檢驗，結(jié)果 顯示，不同產(chǎn)地多莖重樓根莖中均檢測到《中國藥 典》2015 年版規(guī)定的 4 種重樓皂苷（I、II、VI、 VII），不同產(chǎn)地多莖重樓根莖中重樓皂苷（I＋II＋ VI＋VII）總量的范圍在 1.239%～6.236%，均大于 《中國藥典》2015 年版一部規(guī)定的 0.60%的質(zhì)量控 制標準，含量最高的為 S6（劍川馬凳），最低的為S3（大理銀橋），相差 5 倍多；且 S6（劍川馬凳）、 S8（南澗樂秋）產(chǎn)地的（I＋II＋VI＋VII）總含量顯 著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）高于其他產(chǎn)地； S6（劍川馬凳）產(chǎn)地多莖重樓根莖中重樓皂苷 VII、 H、VI、II、III、I、V 及 4 種重樓皂苷（I、II、VI、 VII）的總含量顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01） 高于其他產(chǎn)地；S6（劍川馬凳）、S8（南澗樂秋）重 樓皂苷 III 的含量分別為5.354%、4.710%，顯著（P＜ 0.05）或極顯著（P＜0.01）高于其他產(chǎn)地，且超過 S3（大理銀橋）含量的 42 倍多；除 S8（南澗樂秋）、 S9（巍山龍街）、S10（巍山魏寶山）外，其他產(chǎn)地 均未檢測到重樓皂苷 V；除 S2（云龍長新）、S3（大 理銀橋）、S9（巍山龍街）外其他產(chǎn)地均檢測到重 樓皂苷 H；不同產(chǎn)地多莖滇重樓主要成分含量存在 一定的差異，但總體品質(zhì)較好。  一測多評法（QAMS）與外標法（EMS）測定 不同產(chǎn)地多莖重樓根莖主要活性成分含量比較分析 取 10 批多莖重樓根莖樣品，按照“2.1.3”項 下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件 進樣測定，記錄各色譜峰峰面積，采用外標法對重 樓皂苷 VII、H、VI、II、III、I、V 進行定量測定， 再用所建立的 QAMS 法進行定量計算，以驗證 QAMS 法用于多莖重樓中多指標評價的準確性。測得結(jié)果顯示 2 種方法測得的各成分含量 無明顯差異，QAMS 法可以作為一種簡便準確的 質(zhì)量評價模式，用于多莖重樓中 7 中甾體皂苷類主 要活性成分的含量測定。