黑果枸杞 (Lyciumruthenicum Murr.)又名黑 枸杞,是茄科植物枸杞屬的一種球形漿果。多為棘 刺灌木,分枝多、白色,皮薄,熟后成紫黑色。主要種 植于中國的新疆、青海、寧夏、甘肅等西北地區(qū)。黑 果枸杞含有多種維生素、礦物質(zhì)、原花青和糖類素等 豐富的營養(yǎng)成分。藏醫(yī)稱其名為“旁瑪”,被認為其 性平、味甘、清心熱,主要用于心臟病、月經(jīng)異常、心 熱病等疾病的治療中。《中藥志》中載有將黑枸杞根 皮和果實用于醫(yī)治齒齦出血、尿道結(jié)石和癬疥等疾 病中,具有潤肺止咳、清肺降火、補腎益精和養(yǎng)肝明 目等功效?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,黑枸杞中的 黃 酮 類成分還具有降低總膽固醇、抗炎、降血糖等作用。
KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),HWS-24型電熱恒溫水浴鍋 (上 海 一 恒 科 學(xué) 儀 器 有 限 公 司 ),德 國 梅 特 勒 ABJ220-4NM 型電子分析 天 平(規(guī) 格 為0.005~0.1 mg,上海島韓實業(yè)有限公司),EYELAN-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司),組織勻漿器(上求精玻璃儀器廠),德 國 SigmaS-18K 型 離 心 機 (北京鑫盛 鴻 陽 科 技 有 限 公 司),ThermoScientific MultiskanGO 全波長酶標儀(北京金業(yè)德祥生物科技有限公司)。
灌 胃 器 材,手 術(shù) 器 械(1套),一 次 性 普 通真空采血管和采血針,96孔細胞培養(yǎng)板,2.0mL 凍存管(圓底可立,外旋蓋),5.0mL離心管,1.5mL 微量 離 心 管 (帶 鎖 扣,透 明 尖 底),YYQ-100P 移 液槍。
辛 伐 他 丁 片(杭州默沙東制藥有限公 司,批號:20180423),總膽固醇(TC)檢測試劑盒(南 京建成生物工程研究所,批號:20180526),甘油三酯 (TG)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號: 20180526),低 密 度 脂 蛋 白-膽 固 醇(LDL-C)檢 測 試 劑盒(南京建成生物工程研究所,批 號:20180526), 高密度脂 蛋 白-膽 固 醇(HDL-C)檢 測 試 劑 盒(南 京 建成生物 工 程 研 究 所,批 號:20180526),無 水 乙 醇 (天津市大 茂 化 學(xué) 式 機 廠,批 號20170701),石 油 醚 (天津市富宇精細化工有限公司,批 號:20160716), 膽固醇(上 海 藍 季 有 限 公 司,批 號180110),膽 酸 鈉 (上海藍季有限公司,批號:180305),丙基硫氧嘧啶 (上海藍季有限公司,批號:180317),水合氯醛(國藥 集團化學(xué)試劑有限公司,批號:20160125),復(fù)方氯化 鈉注射液(國藥集團新疆制藥有限公司,生產(chǎn)批號: 1810003),普通級別大鼠維持飼料(新疆醫(yī)科大學(xué)實 驗動物中心提供)。
雄 性 SD 大 鼠,體 質(zhì) 量 (200± 20)g,SPF級飼養(yǎng) 環(huán) 境,批 號:20180321,合 格 證 號: SCXK(新)2015-0003,由新疆醫(yī)科大 學(xué) 實 驗 動 物 中 心提供。
黑果枸杞(采自新疆阿克蘇地區(qū)塔里木 盆地),經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室帕麗達· 阿不力孜教授鑒定為黑果枸杞 (Lyciumruthenicum Murr.)的果實。
本 研 究 是 黑 果 枸 杞系列研究的一部分。該研究中總黃酮的提取方法參 考了以往研究中已確立的提取工藝方法。方法 為將黑果枸杞研磨成粉末狀包裹在濾紙里放入索氏 提取器中,在90℃、150mL 石 油 醚 中 進 行 脫 脂2h 得到經(jīng)脫脂的黑果枸杞粉末物。將經(jīng)脫脂過的黑果 枸杞粉末物,設(shè)定超聲功率為70W、溫度為60℃,用 體積分數(shù)為70% 乙醇為溶劑,料液比為1∶5g/mL 的條件下 超 聲 提 取 45 min,然 后 旋 轉(zhuǎn) 蒸 發(fā) 濃 縮 濾 液、冷凍干燥得粗提物(含量達到4.0%),備用。
高 脂 飼 料 由 按 成 分 比 為 65%大鼠普 通 維 持 飼 料+10%豬 油 +20% 蔗 糖 + 2.5%膽固醇+1%膽 酸 鈉+0.5%丙 基 硫 氧 嘧 啶+ 1%混合調(diào)和劑(雞蛋黃+花生)組成。
SD 大 鼠 先 在 飼 養(yǎng) 溫 度(24 ±2)℃,濕度(50±10)%,明 暗 周 期12h的 環(huán) 境 下 自由飲水,并給予普通飼料飼養(yǎng)1周后,按照體質(zhì)量 隨機分配2組,其中15只大鼠繼續(xù)給予大鼠普通維 持飼料空白對照組,其余75只大鼠給予高脂飼料建 立高脂血癥模型組。每周稱量體重1次,造模3周 后,每組取若干大鼠斷尾采血(期間大鼠不禁食),血 漿凝固后,放入離心機3500 轉(zhuǎn)/min離心10min, 分離血清,取 出 上 清 液,測定大鼠血清中甘油三酯 (TG)、血清 總 膽 固 醇(TC)、高 密 度 脂 蛋 白-膽 固 醇 (HDL-C)和低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)的濃度。
劑 量 的 確 定 選 取 造 模 成 功 的SD大鼠60只,隨機分為6組(每組10只),分別 為正常對照組(NC 組)、高脂血癥模型組(MC 組)、 辛伐他汀組(3.3mg/kg,S組)以及黑果枸杞總黃酮 粗提 物 高 劑 量 組 (100 mg/kg,HF 組)、中 劑 量 組 (50mg/kg,MF 組)和 低 劑 量 組 (25 mg/kg,LF 組)。辛伐他汀片劑對高脂血癥患者的最大劑量推 薦量為30mg,根據(jù)SD大鼠和人體表面積的換算方 法,將高脂血癥大鼠的給藥劑量換算成3.3mg/kg。 黑果枸杞總黃酮粗提物高、中、低劑量組給藥劑量通 過查閱文獻的方法,最終確立為分別為100、 50、25mg/kg。
實驗后各組SD大 鼠的體質(zhì)量均呈現(xiàn)增高趨勢。但是正常對照組、模 型組和黑果枸杞總黃酮粗提物低劑量組 SD 大鼠的 體質(zhì)量增重率較為顯著,與其余組相比差異具有統(tǒng) 計學(xué)意義 (P <0.01),說明黑果枸杞總黃酮粗提物 低劑量組對抑制高脂血癥 SD 大鼠體質(zhì)量的增長效 果并不明顯。辛伐他汀組、黑果枸杞總黃酮粗提物 高劑量組、中劑量組與其余組相比,對高脂血癥 SD 大鼠體質(zhì)量的增長率有抑制作用,差異均有統(tǒng)計學(xué) 意義 (P <0.05),說明高劑量與中劑量的黑果枸杞 總黃酮粗提物同辛伐他丁都具有減緩高脂飼料對高 脂血癥SD大鼠體質(zhì)量增長的效果,結(jié)果見表1。
高脂血癥往往會使機體脂質(zhì)代謝紊亂,導(dǎo)致血 清或 肝 組 織 中 的 HDL-C 水 平 降 低 或 者 LDL-C、 TG、TC等水 平 增 高。本實驗結(jié)果顯示,黑 果 枸 杞 總黃酮粗提物中、高劑量組和辛伐他汀組相同,都具 有減緩高級脂 肪 飼 料 對 SD 大 鼠 體 重 增 長 的 效 果, 且與正常 對 照 組 相 比 差 異 具 有 統(tǒng) 計 學(xué) 意 義 (P < 0.01)。從SD大鼠肝指數(shù)的影響水平看,黑果枸杞總黃酮粗提物中、高劑量組、辛伐他汀組與高脂模型 組比較,肝指數(shù)顯著降低 (P <0.05)。從血清和肝 臟中有關(guān)脂蛋白濃度的變化情況可以看出,與高脂 血癥模型組相比,黑果枸杞總黃酮粗提物中、高劑量 組同辛伐他汀組大鼠血清和肝組織中 HDL-C濃度 升高且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P <0.05),TG、TC、 LDL-C 濃度降低且差 異具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P < 0.01),可以進一步說明黑果枸杞總黃酮具有調(diào)血脂作用,并與其劑量呈正相關(guān)。