1 儀器與試藥
1.1 儀器
LC-20A高效液相色譜儀(島津公司)包括 LC-20AT四元泵,SPD-20A檢測器,LC-20A HPLC 系統化學工作站;十萬分之一電子天平(CP-225D 型,上海滬粵明科學儀器有限公司);萬分之一 電子天平(EL204-IC型,上海滬粵明科學儀器有 限公司);KQ-500DE型超聲波清洗器(昆山舒美超聲儀器有限公司)。
1.2 試藥
石榴子對照藥材(批號 121431-201002)、訶 子對照藥材(批號 121015-201605)、鞣花酸對照 品(批號 11959-201602,純度98%)、胡椒堿對 照品(批號 110775-201706,純度98.9%)均購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈、甲醇為色譜純 (默克公司);水為屈臣氏蒸餾水;其他所用試劑 為分析純。 石榴蓮花散樣品(來源:甘南藏族自治州藏 醫藥研究院4批S1,S2,S3,S4;甘肅省夏河縣藏 醫院3批S5,S6,S7;甘肅省碌曲縣西倉寺院藏醫 院3批S8,S9,S10)。
2 方法與結果
采用ODS-2 HYPERSIL-C18色譜柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm),以乙腈-0.2%磷酸(15∶85)為 流動相,流速1.0 mL·min-1,檢測波長:254 nm, 柱溫30 ℃,進樣量10μL。精密稱取鞣花酸對照品適量,加甲醇制253.2548μg·mL-1的溶液,作為對照品儲備液。 精密吸取對照品儲備液2 mL,置50 mL量瓶中,加 甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。稱取供試品1.0 g,精密稱定,置錐形瓶中, 精密加入甲醇50 mL,稱量,超聲處理40 min,放 冷,用甲醇補足減失的量,濾過,取續濾液2 mL, 置10 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,取續 濾液,即得。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰 性對照溶液各10μL,注入液相色譜儀。結果表 明,供試品色譜中在與對照品色譜相應位置上有色 譜峰,而陰性對照色譜中在與對照品色譜相應位置 上則未檢測到峰,表明其他成分對測定結果無干 擾。
3 討論
色譜柱的選擇:試驗過程中考察了ODS2 HYPERSIL-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)和 Agilent 5 HC-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色譜 柱,結果表明兩根色譜柱出峰效果差別不大,因此 選擇價位低的ODS-2 HYPERSIL-C18色譜柱。因胡椒堿對光十分敏感,易發生光化學歧化 作用產生異構體;故在測定蓽茇中胡椒堿含量時, 取樣后加入溶劑超聲提取、過濾、稀釋等操作過程 中,要特別注意避光,以確保實驗結果的準確性。
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