1 材料
1.1 儀器
Agilent 1100型高效液相色譜儀(安捷倫公 司);XP205型電子天平(1/10萬,梅特勒公 司);Milli-Q超純水機(Millipore公司);KQ500E型醫用數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);PCR儀(ABI VERITI);MM400球 磨儀(Retsch公司);微量紫外分光光度計(Nano Value);EPS-301電泳儀(Amersham公司);全 自動凝膠成像系統(Syngene公司)。
1.2 對照品
綠原酸(批號110753-201314)、3,5-O-二 咖啡酰基奎寧酸(批號111782-201807)和4,5-O二咖啡?;鼘幩幔ㄅ?11894-201102)由中國 食品藥品檢定研究院提供;新綠原酸(批號NCA658144)、隱綠原酸(批號CCA-658288)和3,4- O-二咖啡?;鼘幩幔ㄅ朌CA-250224)由成都 曼思特生物科技有限公司提供;1,3,5-O-三咖啡酰 基奎寧酸(批號TCK-662510)由上海詩丹德標準 技術服務有限公司提供。以上對照品經HPLC-DAD (面積歸一化法)檢測純度均大于98.0%。
1.3 試劑
乙腈(色譜純,Fisher公司);磷酸、甲 醇(分析純,國藥集團化學試劑公司);植 物基因組DNA提取試劑盒(Plant Genomic DNAkit,TIANGEN);2×Taq Master Mix緩沖液 (GK8006,GENEray);ExRed(ZS203-1, 庒盟生物);瓊脂糖(50002,Lonza);ITS2 引物(上海捷瑞生物工程有限公司,ITS2F:5'- ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3';ITS3R:5'-GACG CTCTCCAGACTACAAT-3')。
1.4 樣品
6批滇桂艾納香、7批東風草、3批高艾納香均 由本課題組野外采集;同時制作相應的臘葉標本送 廣西中醫研究院,由黃云峰副研究員鑒定為滇桂艾 納香B.riparia、東風草B.megacephala.、高艾納香 B.repanda。1
2 基原鑒定及生藥學鑒別
滇桂艾納香臘葉標本于2018年3月19日采自廣 西百色市右江區大王嶺,為攀援狀草質藤本。莖圓柱形,葉無柄,葉片卵狀長圓形,邊緣有疏生的點 狀細齒,兩面無毛或被疏柔毛。頭狀花序多數, 徑5~8 mm,在腋生枝頂端排列成密圓錐花序,多 數小圓錐花序再排列成具葉的大圓錐花序,有長 5~10 mm的花序柄;總苞鐘形或圓柱形。東風草標本于2018年3月21日采自貴州省興義 市萬峰湖,攀援狀草質藤本或基部木質。莖圓柱 形,葉片卵形,邊緣有疏細齒,下面無毛或多少被疏毛。頭狀花序疏散,直徑1.5~2 cm,通常1~7 個在腋生小枝頂端排列成總狀或近傘房狀花序,再 排成大型具葉的圓錐花序;花序柄長1~3 cm;總 苞半球形。
3 薄層鑒別
按滇桂艾納香現行質量標準中的薄層鑒別方 法對滇桂艾納香、東風草及高艾納香進行對比試 驗,結果發現,三者均具有相同的一個主斑點,表 明現行質量標準的方法缺乏專屬性,需要對其薄層 方法進行更深入的研究。研究結果建立了兩個自擬 方法,方法一是基于滇桂艾納香中的主要成分(咖 啡酰基奎寧酸類)建立的,該方法可將高艾納香與 滇桂艾納香、東風草區別開;鑒于方法一未能有效 區分滇桂艾納香及東風草,通過更換展開條件和顯 色方法建立了方法二,該方法可將三者區分開,專屬性較強。
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