秦 皮 是 木 犀 科 植 物 苦 櫪 白 蠟 樹,白蠟樹、尖 葉 白 蠟 樹 ． 和宿柱白蠟樹．的干燥枝 皮或干皮，為臨床常用中藥，具有清熱燥濕、收澀止 痢、止帶、明目之功效，臨床上多用于濕熱瀉痢、赤白 帶下、目赤腫痛、目生翳膜等癥。現代藥理學研究 表明其具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等作用。 除《中國藥典》２０１５年版規定的這４種秦皮外，同屬 植物秦嶺白蠟樹、黑蠟子樹、毛白蠟樹也混淆于市場 中做秦皮用，且由于受地理因素和生長環境的 影響，不同產區包括栽培和野生秦皮的化學組成不 盡相同。對藥 材 的 外 觀 檢 查、鑒 別 及 對 幾 個 成 分的含 量 測 定已 不 能 完 全 反 映 其 內 在 質 量。 中藥指紋圖譜因能反映組成中藥多種化學成分的整 體全貌，已成為國際公認的控制中藥或天然藥物質 量的有效手 段。為更全面表征秦皮的整體特 征，本研究擬建立秦皮藥材及其混淆品的高效液相色譜指紋圖譜分析方法，并對不同品種秦皮間的 差異進行比較，以期為秦皮的質量控制提供新依據， 報告如下。

Ａｇｉｌｅｎｔ１２００高效液相色譜儀，包括二 極管陣列檢測器、四元泵、自動進樣器、在線脫氣系 統和柱溫箱；ＡｇｉｌｅｎｔＣｈｅｍｓｔａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ 色譜工作 站（Ａｇｉｌｅｎｔ科技有限公司）。分析天平，ＢＰ２１１Ｄ 型 （北京賽多利斯儀器有限公司）；超聲波清洗器， ＫＱ５２００Ｅ型 （江蘇昆山市超聲儀器有限公司 ）； ＬＧ１６－Ｂ型雷勃 爾 高 速 離 心 機（北京雷勃爾離心機 有限 公 司）。中 藥 色 譜 指 紋 圖 譜 相 似 度 評 價 系 統 （２００４Ａ）。

色譜純甲醇（美國Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ公司）用 于秦皮樣品提取物的制備和分析；色譜純乙酸購于 迪馬科技公司；水為娃哈哈純凈水（中國杭州娃哈哈 集團有限公司）。 對照品 秦 皮 甲 素 （批 號 為 １１０７４１－２００５０６）、秦 皮乙 素 （批 號 為 １１０７４１－２００５０６）、秦 皮 素 （批 號 為 １１１７３１－２００５０１）、莨 菪 亭（批 號 為 １１０７６８－２００５０４）、異莨菪亭（批號為１１１７４１－２００５０１）、丁香苷（批號為 １１１５７４－２００６０３），均由中國食品藥品檢定研究院提 供（中國北京）。對照品秦皮苷（批號為２０１１１２１４）、 橄欖 苦 苷 （批 號 為 ２０１１１２１４）、毛 柳 苷 （批 號 為 ２０１１０９２１）購 于 鼎 瑞 化 工（上 海）有 限 公 司；對 照 品 ６－羥基－７，８－二甲氧 基 香 豆 素、８－羥 基－６，７－二 甲 氧 基 香豆素由中國中醫科學院中醫基礎理論研究所提 供，經 ＨＰＬＣ分析，純度均大于９８％。 ５５批樣品采集于國內各產地，為不同批次樣品 （表１）。樣 品 Ａ１～Ａ５、Ｂ１～Ｂ５、Ｃ１～Ｃ５、Ｄ１～Ｄ５ 分別來源于白蠟樹、尖葉白蠟樹、苦櫪白蠟樹和宿柱 白蠟樹；Ｗ１～ Ｗ３ 秦皮混淆品分別來源于毛白蠟 樹、黑蠟子樹和秦嶺白蠟樹。以上樣品均由中國中 醫研究院劉麗梅教授提供。樣品 Ｓｄ為秦皮對照藥 材———白蠟樹，購于中國食品藥品 檢 定 研 究 院。市 售樣品Ｓ１～Ｓ３１采購于全國各藥店。

１．３ 色 譜 條 件

色 譜 條 件：ＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８色 譜 柱 （２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；柱溫３０ ℃。流動相：Ａ 為甲醇，Ｂ為０．５‰乙酸水緩沖溶液。梯度洗脫，洗 脫程序：５％ ～２０％ Ａ（０～５ ｍｉｎ），２０％ Ａ（５～２０ ｍｉｎ），２０％～６０％ Ａ（２０～７５ｍｉｎ），進樣前預平衡８ ｍｉｎ。流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。進 樣 量：１０μＬ。檢 測 波 長：２３０ｎｍ。

分別精密稱取１１種化學 成分對照品適量，溶解于甲醇配制成一定濃度的貯 備液。分別精密量取一定體積貯備液混勻于１０ｍＬ 量瓶中，加７３％甲 醇 定 容，得 混 合 對 照 品 溶 液。最 終混合對照品溶液中各對照品濃度分別為秦皮甲素 ４５１．９１ｍｇ／Ｌ，秦皮乙素８５．００ｍｇ／Ｌ，秦皮苷３８８． ０２ｍｇ／Ｌ，秦皮素９４．０１ｍｇ／Ｌ，莨菪亭５．１３ｍｇ／Ｌ， 異莨菪亭４．２５ｍｇ／Ｌ，橄欖苦苷５．０８ｍｇ／Ｌ，毛柳苷 ５．４８ｍｇ／Ｌ，丁 香 苷１０．１５ ｍｇ／Ｌ，６－羥 基－７，８－二 甲 氧基香豆素５．４０ｍｇ／Ｌ，８－羥基－６，７－二甲氧基香豆 素４．０５ｍｇ／Ｌ。所 有 對 照 品 溶 液 儲 存 于４ ℃環 境 中，以備使用。

將５５批次干燥藥材分別 粉碎，過６０目篩備用。取秦皮干燥粉末約０．１ｇ，精密稱定，置 具 塞 錐 形 瓶 中，精 密 加 入 ７３％ 甲 醇 １０ ｍＬ，稱定重量，于 冰 水 浴 中 超 聲 提 取６５ｍｉｎ后，取 出，放 冷，用 ７３％ 甲 醇 補 足 減 失 重 量，搖 勻，于 １４０００ｒ／ｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，取上清液過０．４５μｍ 微 孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液。

分別精密吸取對照品溶 液和供試品溶液各１０μＬ，注入高效液相色譜儀，在 確定的色譜條件下檢測，記錄色譜圖，按秦皮甲素峰 計算理論板數約為１６０００，各色譜峰分離度均符合 要求。

精 密 吸 取 秦 皮 藥 材（Ｓ１１）同 一供試 品 溶 液 １０μＬ，連 續 進 樣 ６ 次，記 錄 指 紋 圖 譜。以秦皮甲素峰的保留時間和峰面積為１．０，計 算各峰相對保留時間、相對峰面積及相對標準偏差 （ｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ，ＲＳＤ）。各主要色譜峰 相對保留時 間 ＲＳＤ 為０．０２％～０．３８％，相 對 峰 面 積 ＲＳＤ為１．５３％～３．５５％，說明精密度良好。

精密稱取同一批號的供試品 ６份，按照上述 方 法 制 備 供 試 品 溶 液，分 別 進 樣，記 錄指紋圖譜。以秦皮甲素色譜峰的保留時間和峰面 積為１．０，計算各峰相對保留時間、相對峰面積及其 ＲＳＤ。各 主 要 色 譜 峰 相 對 保 留 時 間 ＲＳＤ 為 ０．０３％～０．６７％，相 對 峰 面 積 ＲＳＤ 為 １．１５％ ～ ３．９８％，表明方法重現性良好。

精密吸取同一供試品溶液１０ μＬ，分別在０，１．５，３，６，９，１２，１８，２４，３６，４８，７２ｈ各 進樣１次，記錄指紋圖譜。以秦皮甲素色譜峰的保 留時間和峰面積為１．０，計算各峰相對保留時間、相 對峰 面 積 及 其 ＲＳＤ。各 主 要 色 譜 相 對 保 留 時 間 ＲＳＤ 為 ０．０３％ ～０．８６％，相 對 峰 面 積 ＲＳＤ 為 １．７５％～４．９８％，說明樣品７２ｈ內穩定。

秦皮樣品指紋圖譜中主要色譜峰 分別取１１種化學成分混合對照品溶液進樣分析， 根據相同色譜分離條件下，同一化合物保留時間相 同、紫外光譜一致的原則，比較供試品和各對照品的 色譜峰，指認化合物。通過比較秦皮供試品和各對 照品的色譜峰保留時間和紫外光譜圖，指認出１１個 化合物的色譜峰，分別是毛柳苷、秦皮甲素、丁香苷、 秦皮苷、秦皮乙素、秦皮素、異莨菪亭、莨 菪 亭、６－羥 基－７，８－二甲氧基香豆素、８－羥基－６，７－二甲氧基香豆 素和橄欖苦苷。

為確保指紋圖譜信息的豐富程度和較好分離情 況、較大指紋信號和良好均化程度，同時又具有較好 的精密度和重現性，指紋圖譜檢測條件的選擇至關 重要。本研究采用 Ｃ１８色 譜 柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ， ５μｍ），對流動 相 的 組 成、配 比、檢測波長等因素進 行優化，確定最佳色譜條件。在流動相系統的選擇 中，分別以甲 醇－水，甲 醇－１ ｍｍｏｌ／Ｌ 乙 酸 銨，甲 醇－０．５‰乙酸水緩沖溶液，甲醇－１‰乙酸水緩沖 溶液等不同濃度、不同比例的流動相系統進行等度 和梯度洗脫試驗，結果表明，用甲醇－０．５‰乙酸水 緩沖溶液進行梯度洗脫為佳，加入乙酸后峰形尖銳 且分離度較好，在調整好流動相的不同時間洗脫比 例之后，各峰的保留時間適中，且基線較平穩，不易 漂移，有利于指紋圖譜的分析。