連翹為木犀科連翹屬植物連翹[Forsythia suspensa （Thunb.）Vahl]的干燥果實，氣微香，味苦，性微寒，歸肺、 心、小腸經，具有清熱解毒、消腫散結、疏散風熱等功效， 有“瘡家圣藥”之稱。連翹在臨床上常用于治療癰疽、瘰 疬、乳癰、丹毒、風熱感冒、溫病初起、溫熱入營、高熱煩 渴等癥 ?，F代藥理研究顯示，連翹具有抗炎、抗病毒、 解熱鎮痛、止嘔、保肝等作用，具有重要的開發價值 。 然而，目前研究者對連翹化學成分的研究多集中于單個 成分的提取分離與結構鑒定 ，檢測手段單一，在線分 離與系統分析的報道較少，且所建立方法不能全面反映 連翹藥材的組成，這限制了對其藥效物質基礎的全面認 識及多成分的快速定性定量分析，不利于該藥材資源的 深入開發與利用。隨著對連翹藥理作用研究的深入，其 化學成分的全面快速鑒定成為亟待解決的問題。

1 材料

1.1 儀器

Acquity UPLC 型 UPLC 儀（美國 Waters 公司）；AB Sciex Triple-TOFTM 5600 型 MS 儀（美國 Sciex 公司）； 昆山舒美KQ-300DB 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公 司）；BSA224S-CW型電子天平、BP211D型電子天平（德 國Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

連翹酯苷A、連翹苷、綠原酸對照品（成都瑞芬思生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 號 分 別 為 L-012-171216、L010- 170301、L-007-160504，純度均≥98％）；蘆丁對照品（國 家食品藥品檢定研究院，批號：100080-200707，純度：≥ 98％）；甲醇（分析純，西隴科學股份有限公司）；乙腈（色 譜純，德國 Merck 公司）；甲酸（色譜純，美國 Fisher 公 司）；蒸餾水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）。

1.3 藥材

連翹藥材（青翹，采收時間為 2018 年 6 月，批號： 180601）購于北京同仁堂（亳州）飲片有限責任公司，經 黑龍江省中醫藥科學院霍金海副研究員鑒定為木犀科 連翹屬植物連翹[F. suspensa（Thunb.）Vahl]的果實。藥 材粉碎后過三號篩，備用。

2 方法

2.1 LC條件

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm × 2.1 mm，1.7 μm）；流動相：0.1％甲酸水溶液（A）-0.1％甲酸 乙腈溶液（B），梯度洗脫（0～3 min，5％B→25％B；3～ 13 min，25％B→80％B；13～23 min，80％B→100％B； 23～23.1 min，100％B→5％B；23.1～25 min，5％B）；流 速：0.3 mL/min；柱溫：30 ℃；進樣量：5 μL。

2.2 MS條件

離子源：電噴霧離子源（ESI）；離子化模式：電噴霧 正、負離子模式；離子噴霧電壓（ESI + /ESI －）：5 500 V/－4 500 V；離子源溫度：550 ℃，去簇電壓：80 V/－80 V；碰撞能量：35 eV/－35 eV，碰撞活化掃描能量：15 eV； 霧化氣體：N2；霧化氣、輔助氣壓力：379.2 kPa；氣簾氣壓 力：241.3 kPa；質量掃描范圍：80～1 500 Da。對響應值 超過100 cps的8個最高峰進行二級質譜掃描，子離子質 量 掃 描 范 圍 為 50～1 500 Da，開 啟 動 態 背 景 扣 除 （DBS）。采用 Analyst TF 1.6 軟件進行數據采集，采用 PeakView 2.0軟件進行數據處理。

2.3 供試品溶液的制備

取連翹細粉約1.0 g，精密稱定，置于150 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲（功 率：300 W，頻率：100 kHz）處理30 min；放冷后，再次稱 定質量，用甲醇補足減失質量，搖勻；溶液以0.22 µm微 孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4 對照品溶液的制備

取連翹酯苷 A、連翹苷、綠原酸、蘆丁對照品適量， 精密稱定，分別置于10 mL量瓶中，以甲醇溶解并定容， 分別制成質量濃度均為20 μg/mL的對照品溶液，即得。

2.5 UPLC-MS分析

取“2.3”“2.4”項下對照品溶液和供試品溶液，按 “2.1”“2.2”項下 LC 與 MS 條件進樣測定，記錄色譜圖， 用于后續成分篩查與結構鑒定。

3 結果

經與對照品圖譜及相關文獻數據對照，并結合 UPLC-MS所測得化合物的高分辨相對分子量結果進行 成分分析，共鑒定出連翹藥材中的45個化合物，包括7 個苯乙醇苷類成分、5個木脂素類成分、5個萜類成分、12 個黃酮類成分、7個有機酸類成分、2個酚類成分、2個醌 類成分、2個苷類成分和3個其他成分。本研究共鑒定出45種化合物，主要包括木脂素類、 黃酮類、萜類、有機酸類等。選擇每一類化合物的代表 性化合物，同時考慮到連翹酯苷 A 和連翹苷為 2015 版 《中國藥典》（一部）中連翹項下含量測定的主要特征性 成分，故對連翹酯苷A、連翹苷、松脂醇、金絲桃苷、漢黃 芩苷、阿魏酸和奎寧酸等7種化合物進行裂解特征分析。連翹含有大量的黃酮類成分，主要包 括黃酮、黃酮醇、二氫黃酮等結構母核，據文獻報道，連 翹中含有金絲桃苷。36號化合物在ESI－模式下的準 分子離子為m/z 463[M－H]－，糖鏈均裂脫去1分子半乳 糖形成碎片離子m/z 300[M－H－C6H11O5] －；糖鏈異裂脫 去 1 分 子 半 乳 糖 形 成 碎 片 離 子 m/z 301[M － H － C6H10O5] －；基峰離子 m/z 300 失去 1 分子 CO 和 1 個 H 形 成碎片離子m/z 271[M－H－C6H11O5－CO－H]－；碎片離 子m/z 301失去1分子CO和1分子H2O形成碎片離子m/z 255[M－H－C6H10O5－CO－H2O]－。

4 討論

采用的UPLC-Q-TOF-MS 技術能夠在較短 時間內完成復雜成分的分析工作，為連翹的化學成分鑒 定提供了一種高效的分析方法。中藥材成分復雜， 且不同成分之間的含量相差懸殊，UPLC系統采用粒徑 小于 2 µm 的柱填料用于成分分離，與傳統高效液相色 譜（HPLC）系統普遍采用的5 µm柱填料相比，前者理論 板數更高，可獲得更好的分離效果。由于連翹中含有大 量的黃酮類化合物，因此本課題組在流動相中加入 0.1％甲酸，以提高黃酮類化合物檢測的靈敏度。質譜條 件選擇的離子噴霧（ESI + /ESI－ ）電壓為 5 500 V/－4 500 V，在這個電壓條件下，所有離子都能獲得較高的電離效 率。去簇電壓選擇80 V/－80 V，在這個電壓條件下，可以 有效消除溶劑的離子簇，也可防止母離子發生源內裂解。



 

免責聲明：文章僅供學習和交流，如涉及作品版權問題需要我方刪除，請聯系我們，我們會在第一時間進行處理。