1 材料與方法
1.1 儀器
美國Finnigan公司TSQ Quantum Discovery MAX 型液質聯用系統(LC-MS/MS,美國Finnigan公司);Eppendorf 5427 R臺式高速冷凍離心機(Eppendorf中 國有限公司);XW-80A 旋渦混合器(上海青浦滬西儀 器廠);BS110S 型電子天平 [ 賽多利斯科學儀器(北 京)有限公司];昆山舒美KQ-500DE型數控超聲波清潔器(昆山市超聲儀器有限公司)。
1.2 藥物與試劑
芍藥苷(純度:96.4%,批號:110736-201438)購 自中國食品藥品檢定研究院;黃芩苷(純度:93.3%, 批號:110715-201318)購自中國食品藥品檢定研究 院;黃芪甲苷(內標,純度:93.0%,批號:110781- 201515)購自中國食品藥品檢定研究院;芍藥、黃 芩、檳榔、厚樸、草果、知母、甘草藥材購自湖北蘄 州中藥材市場;色譜純甲醇和乙腈購自美國 Fisher Scientific公司;水為娃哈哈飲用純凈水(杭州娃哈哈 集團有限公司)。
1.3 動物
6 只雄性 SD 大鼠,體質量(220±20)g,購自 北京維通利華動物實驗中心,實驗動物合格證號: SCXK(京)2014 – 0016。動物飼養于溫度控制在 (25±2)℃、濕度控制在40% – 60%的環境中,每天 交替進行12 h光照,12 h黑暗處理。
2 結果
采用大鼠空白血漿樣品、大鼠空白血 漿加入被測物標準液和內標的樣品、大鼠給藥1 h后 血漿樣品進行處理進樣,得到大鼠血漿中被測物和內 標的典型色譜圖。顯示血漿中內源性物質不 干擾被測物和內標的測定,且被測物和內標之間的分 離度良好。芍藥苷、黃芩苷和內標的出峰時間分別為 1.91 min、3.08 min、3.69 min,出峰位置無干擾,方法 的專屬性良好。采用加權最小二乘法計 算標準曲線方程,以被測物與內標黃芪甲苷的峰面積 比值為Y,以被測物的質量濃度為X,得到芍藥苷的回 歸方程為Y = 5.148×10-4 X – 2.6148×10-3,權重因子 W = 1/X2 ,相關系數r 2 = 0.995 1;黃芩苷的回歸方程為 Y = 6.613×10-4 X + 1.863 2×10-3,權重因子W = 1/X2 , 相關系數r 2 = 0.996 5。芍藥苷和黃芩苷的定量下限均為5 ng·mL-1,連續進樣6次,被測物準確度在80% – 120%范圍內,精密度(RSD)小于20%,參照《藥物非 臨床藥代動力學研究技術指導原則》,該結果符合生 物樣品測試要求。
3 討論
采用高效液相色譜法探討達原飲中芍藥苷、黃芩苷等有效成分含量的研究已有報道,考慮到高 效液相色譜法的靈敏度較低,且達原飲中各有效成分 的含量較低,故本研究采用LC-MS/MS技術研究達原 飲中兩種成分在大鼠體內的藥代動力學特征,建立 了大鼠血漿中芍藥苷和黃芩苷濃度同時測定的方法, 并進行了方法學驗證。兼顧本實驗室液質聯用系統 的儀器性能、達原飲中芍藥苷和黃芩苷的含量及給 藥劑量,本研究將兩種化合物的線性范圍設定為5 ~ 2000 ng·mL-1可以滿足本藥代動力學研究的需要。
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